雍正只有一個正式皇后，姓烏喇那拉氏，是內大臣費揚古的女兒。
這位皇后少年時代即入宮侍奉，當時康熙帝很喜愛她，作主將她許配皇四子，為雍親王的正室嫡福晉。雍正元年被冊為皇后時已屆中年了。雍正帝同她相親相愛，可惜她死於雍正九年九月。死的那一天，雍正帝異常傷心，他自己大病剛好，想親自去為皇后合棺送行，大臣們竭力勸阻才作罷。於是下諭旨道：「皇后自重髫之年即侍奉皇父，與朕結合，四十多年孝順恭謹始終如一。我因患病多時好容易痊癒，若親臨喪事，恐怕會觸景生情過度悲傷，致使舊病復發。我未盡到夫婦間的禮數，心中很是難受，但大臣們勸我說，明代也沒有皇后喪禮皇帝非親自莫祭不可的規定，因此，我今特今皇子們朝夕奠祭。」言語中流露出莫大的哀痛。
烏喇那拉皇后謚號「孝敬」，與雍正帝合葬泰陵。繼承皇位的皇四子弘歷(乾隆帝)，是雍正帝的熹貴妃鈕祜祿氏生的。熹貴妃在乾隆朝被尊為皇太后，於乾隆四十二年才死，死後被謚為皇后。